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中藥材鑒別之川貝母

媒體:神農采電商平臺  作者:內詳   專業號:川貝母 2024-05-23 10:20:59

 

本品為百合科植物川貝母Fritillaria cirrhosa D. Don、暗紫貝母Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C.Hsia、甘肅貝母Fritillaria przewalskii Maxim.、梭砂貝母Fritillaria delavayi Franch.、太白貝母Fritillaria taipaiensis P.Y.Li或瓦布貝母Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C.Hsiavar wabuensis(S.Y.Tang et S.C.Yue)Z.D.Liu,S.Wang et S.C.Chen的干燥鱗莖。按性狀不同分別習稱“松貝”、“青貝”、“爐貝”和“栽培品”。夏、秋二季或積雪融化后采挖,除去須根、粗皮及泥沙,曬干或低溫干燥。

性狀

 

 

松貝  呈類圓錐形或近球形,高0.3~0.8cm,直徑0.3~0.9cm。表面類白色。外層鱗葉2瓣,大小懸殊,大瓣緊抱小瓣,未抱部分呈新月形,習稱“懷中抱月”;頂部閉合,內有類圓柱形、頂端稍尖的心芽和小鱗葉1~2枚;先端鈍圓或稍尖,底部平,微凹入,中心有1灰褐色的鱗莖盤,偶有殘存須根。質硬而脆,斷面白色,富粉性。氣微,味微苦。

青貝  呈類扁球形,高0.4~1.4cm,直徑0.4~1.6cm。外層鱗葉2瓣,大小相近,相對抱合,頂部開裂,內有心芽和小鱗葉2~3枚及細圓柱形的殘莖。

爐貝  呈長圓錐形,高0.7~2.5cm,直徑0.5~2.5cm。表面類白色或淺棕黃色,有的具棕色斑點。外層鱗葉2瓣,大小相近,頂部開裂而略尖,基部稍尖或較鈍。

栽培品呈類扁球形或短圓柱形,高0.5~2cm,直徑1~2.5cm。表面類白色或淺棕黃色,稍粗糙,有的具淺黃色斑點。外層鱗葉2瓣,大小相近,頂部多開裂而較平。

 

鑒別

 

(1)本品粉末類白色或淺黃色。

松貝、青貝及栽培品  淀粉粒甚多,廣卵形、長圓形或不規則圓形,有的邊緣不平整或略作分枝狀,直徑5~64μm,臍點短縫狀、點狀、人字狀或馬蹄狀,層紋隱約可見。表皮細胞類長方形,垂周壁微波狀彎曲,偶見不定式氣孔,圓形或扁圓形。螺紋導管直徑5~26μm。

爐貝  淀粉粒廣卵形、貝殼形、腎形或橢圓形,直徑約至60μm,臍點人字狀、星狀或點狀,層紋明顯。螺紋導管和網紋導管直徑可達64μm。

(2)取本品粉末10g,加濃氨試液10ml,密塞,浸泡1小時,加二氯甲烷40ml,超聲處理1小時,濾過,濾液蒸干,殘渣加甲醇0.5ml使溶解,作為供試品溶液。另取貝母素乙對照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法(通則0502)試驗,吸取供試品溶液1~6μl對照品溶液2μl,分別點于同一硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液-水(18:2:1:0.1)為展開劑,展開,取出,晾干,依次噴以稀碘化鉍鉀試液和亞硝酸鈉乙醇試液。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同顏色的斑點。

(3)聚合酶鏈式反應-限制性內切酶長度多態性方法。

模板DNA提取  取本品0.1g,依次用75%乙醇1ml、滅菌超純水1ml清洗,吸干表面水分,置乳缽中研磨成極細粉。取20mg,置1.5ml離心管中,用新型廣譜植物基因組DNA快速提取試劑盒提取DNA[加入緩沖液AP1 400μl和RNA酶溶液(10mg/ml)4μl,渦漩振蕩,65℃水浴加熱10分鐘,加入緩沖液AP2 130μl,充分混勻,冰浴冷卻5分鐘,離心(轉速為每分鐘14000轉)10分鐘;吸取上清液轉移入另一離心管中,加入1.5倍體積的緩沖液AP3/E,混勻,加到吸附柱上,離心(轉速為每分鐘13000轉)1分鐘,棄去過濾液,加入漂洗液700μl,離心(轉速為每分鐘12000轉)30秒,棄去過濾液;

再加入漂洗液500μl,離心(轉速為每分鐘12000轉)30秒,棄去過濾液;再離心(轉速為每分鐘13000轉)2分鐘,取出吸附柱,放入另一離心管中,加入50μl洗脫緩沖液,室溫放置3~5分鐘,離心(轉速為每分鐘12000轉)1分鐘,將洗脫液再加入吸附柱中,室溫放置2分鐘,離心(轉速為每分鐘12000轉)1分鐘],取洗脫液,作為供試品溶液,置4℃冰箱中備用。另取川貝母對照藥材0.1g,同法制成對照藥材模板DNA溶液。

PCR-RFLP反應  鑒別引物:5'CGTAACAAGGTTT-CCGTAGGTGAA3'和5'GCTACGTTCTTCATCGAT3'。PCR反應體系:在200μl離心管中進行,反應總體積為30μl,反應體系包括10×PCR緩沖液3μl,二氯化鎂(25mmol/L)2.4μl,dNTP(10mmol/L)0.6μl,鑒別引物(30μmol/L)各0.5μl,高保真Taq DAN聚合酶(5U/μl)0.2μl,模板lμl,無菌超純水21.8μl。將離心管置PCR儀,PCR反應參數:95℃預變性4分鐘,循環反應30次(95℃30秒,55~58℃30秒,72℃30秒),72℃延伸5分鐘。取PCR反應液,置500μl離心管中,進行酶切反應,反應總體積為20μl,反應體系包括10×酶切緩沖液2μl,PCR反應液6μl,Sma I(10U/μl)0.5μl,無菌超純水11.5μl,酶切反應在30℃水浴反應2小時。另取無菌超純水,同法上述PCR-RFLP反應操作,作為空白對照。

電泳檢測  照瓊脂糖凝膠電泳法(通則0541),膠濃度為1.5%,膠中加入核酸凝膠染色劑GelRed;供試品與對照藥材酶切反應溶液的上樣量分別為8μl,DNA分子量標記上樣量為1μl(0.5μg/μl)。電泳結束后,取凝膠片在凝膠成像儀上或紫外透射儀上檢視。供試品凝膠電泳圖譜中,在與對照藥材凝膠電泳圖譜相應的位置上,在100~250bp應有兩條DNA條帶,空白對照無條帶。

 

檢查

 

水分  不得過15.0%(通則0832第二法)。

總灰分  不得過5.0%(通則2302)。

浸出物】 照醇溶性浸出物測定法(通則2201)項下的熱浸法測定,用稀乙醇作溶劑,不得少于9.0%。

含量測定】 對照品溶液的制備  取西貝母堿對照品適量,精密稱定,加三氯甲烷制成每1ml含0.2mg的溶液,即得。

標準曲線的制備  精密量取對照品溶液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、1.0ml,置25ml具塞試管中,分別補加三氯甲烷至10.0ml,精密加水5ml、再精密加0.05%溴甲酚綠緩沖液(取溴甲酚綠0.05g,用0.2mol/L氫氧化鈉溶液6ml使溶解,加磷酸二氫鉀1g,加水使溶解并稀釋至100ml,即得)2ml,密塞,劇烈振搖1分鐘,轉移至分液漏斗中,放置30分鐘。取三氯甲烷液,用干燥濾紙濾過,取續濾液,以相應的試劑為空白,照紫外-可見分光光度法(通則0401),在415nm的波長處測定吸光度,以吸光度為縱坐標,濃度為橫坐標,繪制標準曲線。

測定法  取本品粉末(過三號篩)約2g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,加濃氨試液3ml,浸潤1小時,加三氯甲烷-甲醇(4:1)混合溶液40ml,置80℃水浴加熱回流2小時,放冷,濾過,濾液置50ml量瓶中,用適量三氯甲烷-甲醇(4:1)混合溶液洗滌藥渣2~3次,洗液并入同一量瓶中,加三氯甲烷-甲醇(4:1)混合溶液至刻度,搖勻。精密量取2~5ml,置25ml具塞試管中,水浴上蒸干,精密加入三氯甲烷10ml使溶解,照標準曲線的制備項下的方法,自“精密加水5ml”起,依法測定吸光度,從標準曲線上讀出供試品溶液中西貝母堿的重量(mg),計算,即得。

 本品按干燥品計算,含總生物堿以西貝母堿(C27H43NO3)計,不得少于0.050%。

其他

 

 

性味與歸經】 苦、甘,微寒。歸肺、心經。

功能與主治】 清熱潤肺,化痰止咳,散結消癰。用于肺熱燥咳,干咳少痰,陰虛勞嗽,痰中帶血,瘰疬,乳癰,肺癰。

用法與用量】 3~10g;研粉沖服,一次1~2g。

注意】 不宜與川烏、制川烏、草烏、制草烏、附子同用。

貯藏】 置通風干燥處,防蛀。

 

 

(內容來源:《中國藥典2020年版》,圖片來源:神農采電商平臺。由神農采收集整理,僅供學習交流使用,如有侵權請聯系刪除。神農采電商平臺會持續關注中藥材行業的新政策、新發展,感謝您對神農采的關注和支持!)

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